Expertise et Offres de service

Les activités enzymatiques des kinases sont dosées en plaques à 384 puits à l'aide du kit de dosage ADP-GloTM (Promega, Madison, WI). Ce test permet la détection de l'ADP par luminescence qui fournit une méthode de criblage homogène et à haut débit pour mesurer l'activité kinase en quantifiant la quantité d'ADP produite au cours d'une réaction kinase.

Nous proposons des essais enzymatiques sur cibles kinases :

• criblage primaire (panel de base ou à façon),
• détermination de concentrations inhibitrices médianes (IC50),
• etude du mécanisme d'inhibition activité enzymatique de composé par modélisation par la méthode de Michaelis et Menten et Lineweaver-Burk   

Cibles kinases à disposition par famille :

• GMGC : Hs_CDK2/CyclinA, Hs_CDK5/p25, Hs_CDK9/CyclinT, Hs_CLK1, Rn_DYRK1A, Hs_GSK3α, Hs_GSK3β, Ssc_GSK3α/β, Pf_GSK3,
• CAMK : Hs_PIM1, Hs_PIM2,
• CK1 : Hs_CK1ε, Ssc_CK1δ/ε, Lm_CK1,
• TK : Hs_ABL1, Hs_EGFR, Hs_JAK3, Hs_VEGFR2, Hs_FGFR1,
• Autres : Hs_HASPIN, Hs_NEK6, Hs_NEK7, Ld_TLK,

Homo sapiens (Hs), Sus scrofa domesticus (Ssc), Plasmodium falciparum (Pf), Leishmania major (Lm), Leishmania donovani (Ld), Mus musculus (Mm), Rattus norvegicus (Rn).

équipements

• Chaîne de robots de distribution PerkinElmer Janus Expanded (2016) et Janus Mini (2014),
• Lecteur Envision avec upgrade PerkinElmer (Filtre et TR-FRET (2014), monochromateur et stacker (2016), Ultra Lumi (2018)),

Principe 

La compréhension des mécanismes physiologiques et la découverte de nouvelles molécules thérapeutiques implique de savoir quantifier les interactions entre molécules. La Microscale Thermophoresis ou Thermophorèse à micro-échelle (MST) est une méthode permettant d’atteindre cet objectif grâce au calcul d’une constante de dissociation à l’équilibre (KD). Son fonctionnement repose sur le principe de la thermophorèse, c’est-à-dire la migration des molécules dans un gradient de température. Les solutions à analyser sont contenues dans des capillaires et soumises à un gradient de température par l’intermédiaire d’un laser infrarouge. Le mouvement des molécules peut alors être étudié grâce à la détection d’une fluorescence. La MST peut être utilisée pour la mesure d’interaction entre divers types de molécules et à partir de matrices complexes telles que les lysats cellulaires. Cet outil offre de multiples avantages en comparaison avec d’autres techniques, comme le fait qu’elle ne nécessite pas l’immobilisation du composant à analyser contrairement à la Résonance plasmonique de surface (SPR), qu’elle ne requiert que quelques microlitres d’échantillon à la différence de la Titration calorimétrique isotherme (ITC) et qu’elle soit moins coûteuse que le Transfert d’énergie entre molécules fluorescentes (FRET).

Equipements

• Monolith Nt115 et Label Free (2018), Nanotemper