KISSf, plate-forme de criblage d'inhibiteurs de protéines kinases

La plate-forme spécialisée de criblage d'inhibiteurs KISSf (Kinase Inhibitor Specialized Screening facility) offre un service d'évaluation à moyen-débit de la bioactivité de composés chimiques. En utilisant un panel sélectionné de protéines kinases, les analyses réalisées permettent d'évaluer les propriétés thérapeutiques de molécules d'intérêt. Son expérience a permis d’évaluer et de mettre en évidence de nombreux composés intervenant sur des mécanismes cellulaires et plus particulièrement sur la mitose et la mort cellulaire programmée. Ces travaux orientés dans le domaine de la biologie et de la santé ont donc pour objectif de mettre en évidence de futurs candidats médicaments.

La plate-forme a donc pour mission de produire de nouvelles cibles kinases et de développer des tests enzymatiques ou d’interaction en vue de pouvoir réaliser des campagnes de criblage moléculaires. Elle bénéficie d’une expertise en expression de protéines recombinantes en cellule d’insecte et d’une chaine de purification automatisée.

Les méthodes de criblage enzymatique utilisées par KISSf reposent principalement sur une méthode bioluminescente ADP Glo (Promega) permettant de doser la consommation d'ATP utilisé lors des réactions enzymatiques.

Pour les méthodes de criblage d’interaction moléculaire, la plate-forme a choisi la technologie MicroScale Thermophoresis (NanoTemper) qui est basée sur un principe physique pour les études d'interaction de biomolécules. Elle mesure les changements de mobilité de molécules dans des gradients de température microscopiques. La technologie permet de détecter les changements de taille, de charge et d'hydratation des molécules. Des développements sont également en cours pour envisager des méthodes alternatives et/ou complémentaires au criblage moléculaire.

La réalisation des tests kinases est automatisée. La préparation des plaques de dosage, la réaction et l'incubation sont effectuées à l’aide de robots de distribution (JANUS Expanded et Janus Mini de PerkinElmer).

La révélation des réactions est réalisée par la méthode bioluminescente ADP glo (Promega) permettant de doser la consommation d'ATP utilisé lors des réactions enzymatiques. La lecture des plaques est effectuée sur lecteur EnVision (PerkinElmer). Le traitement des données est réalisé grâce au logiciel GraphPad PRISM6.

Par ailleurs, l'acquisition en 2016 d'un système de chromatographie AKTA Start et d'un caisson de réfrigération à 4°C, nous a permis d'automatiser la méthode de purification des protéines recombinantes, de standardiser et d'améliorer nos méthodes de production de cibles ainsi que de développer et d'élargir notre panel de cibles kinases proposé.

Nous disposons également d'un robot à tête 96 canaux (Nimbus, Hamilton) nous permettant d'effectuer des tests de prolifération cellulaire ainsi que des tests de nécroptose.

Dernières acquisitions (en cours de développement): (i) IncuCyte (novembre 2017, Essen bioscience, Sartorius) qui nous permet de suivre le devenir des cellules en temps réel; (ii) deux lecteurs permettant la réalisation d'expériences de thermophorèse (avril 2018, Microscale thermophoresis, Nanotemper, Münich, Allemagne) afin de caractériser les interactions entre les molécules hits de criblage et leur cible thérapeutique (détermination de constantes d'affinité, Kd).